B Ioquímica I – 2do Cuatrimestre 2004 Trabajo Práctico

b ioquímica i – 2do. cuatrimestre 2004 trabajo práctico caracterización de hidratos de carbono objetivo: identificar el azúc

B
ioquímica I – 2do. cuatrimestre 2004
Trabajo Práctico
Caracterización de hidratos de carbono
OBJETIVO:
Identificar el azúcar presente en distintas soluciones problema,
aplicando reacciones que reconocen determinadas propiedades de los
azúcares.
Esquema de identificación:
(-) No azúcar
M olisch- (-) No reductor: Sacarosa Hidrólisis y Selivanoff
(+) Azúcar  Fehling- (-)Glucosa
(+) Reductor  Selivanoff-
(+) Fructosa
INTRODUCCIÓN:
La característica química principal de los hidratos de carbono es la
presencia de un grupo carbonilo (aldehído o cetona) y de varios grupos
hidroxilo.
Los monosacáridos en medio ácido fuerte se deshidratan para dar
furfurales:

En el caso de oligo y polisacáridos, el medio ácido cataliza la
hidrólisis de los enlaces glicosídicos, por lo que las reacciones
también son válidas.
Los furfurales se condensan con diversos fenoles y aminas dando
productos coloreados.
En la reacción de Molish, el agregado de ácido sulfúrico concentrado a
una disolución de azúcar provoca la deshidratación del glúcido en la
interfase, para dar un anillo de furfural o hidroximetilfurfural que
reacciona con -naftol, para dar un producto de color púrpura. Ésta es
una prueba general de hidratos de carbono.

L
as cetosas se deshidratan más rápidamente que las aldosas. Éste es el
fundamento de la prueba de Selivanoff, el furfural formado reacciona
con resorcinol para dar un producto coloreado. Con cetosas se observa
aparición de color mucho más rápido que con aldosas. Esta prueba se
usa para distinguir cetosas.
Otra propiedad aprovechada para la identificación de azúcares es el
poder reductor. El grupo carbonilo de los glúcidos es oxidado a
carboxilo por agentes oxidantes suaves, el más empleado es el catión
Cu2+, cuyas sales son de color azul, éste ión se reduce a Cu+, que
forma un precipitado rojizo de Cu2O. Éste es el fundamento de la
reacción de Fehling, que se hace en medio básico fuerte
(NaOH), lo que requiere la presencia del tartrato como estabilizador
del Cu2+, al formar un complejo, de lo contrario se formaría Cu(OH)2
que es insoluble.
El grupo reaccionante es el aldehido de la aldosa, sin embargo, las
cetosas en condiciones basicas se tautomerizan a aldosas, debido a un
equilibrio ceto-enol catalizado por el medio basico. En el caso de la
fructosa, esta se isomeriza a Glucosa y Manosa, según el esquema
indicado mas abajo.
Oxidación del Aldehido:

E
quilibrio ceto-enol para la Fructosa en medio basico:
Complejo Trartrato-Cobre:

PREPARACIÓN DE REACTIVOS:
Reactivo de Molisch:
Disolver 0.5 g de -naftol en 10 ml de etanol 95%. Almacenar protegido
de la luz, a temperatura ambiente.
Reactivo de Fehling:
Mezclar volúmenes iguales de los dos reactivos:
Fehling A: disolver 7 g de sulfato cúprico monohidrato en 100 ml de
agua destilada.
Fehling B: disolver 35 g de tartrato de sodio y 10 g de hidróxido de
sodio en 100 ml de agua destilada.
Agitar y calentar a ebullición durante 1 minuto.
Reactivo de Selivanoff:
Disolver 0.05 g de resorcina en 100 ml de HCl 3M. Almacenar en
oscuridad.
PROCEDIMIENTO:
Todas las reacciones se harán en tubos de ensayo. Es esencial que el
calentamiento a llama directa se haga con cuidado, para evitar
proyecciones.
Reacción de Molisch:
A 2 ml de solución de azúcar agregarle 2 gotas de reactivo de Molisch.
Con pipeta Pasteur dejar resbalar por la pared del tubo 2 ml de ácido
sulfúrico concentrado, sin mezclar, para que se forme una capa en el
fondo del tubo. Positivo: anillo violeta oscuro en la interfase.
(Cuidado con el Sulfúrico!!!)
Reacción de Fehling:
A 1 ml de la solución de azúcar agregarle 2 gotas de reactivo de
Fehling y calentar a ebullición por 1 minuto. Positivo: precipitado
naranja a rojo.
Prueba de Selivanoff:
A 1 ml de solución de azúcar agregarle 1 ml de reactivo de Selivanoff.
Calentar a ebullición por 1 minuto. Positivo: color rojo.
Hidrólisis ácida de un disacárido:
Mezclar 1 ml de solución de azúcar con 1 ml de HCl 0,5N y hervir por 1
minuto. Luego hacer la prueba de Selivanoff.
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